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恒遠(yuǎn)為您總結(jié)ELISA實(shí)驗(yàn)失敗的原因
更新時(shí)間:2021-02-03 點(diǎn)擊次數(shù):1416
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)也同樣如此,成功的實(shí)驗(yàn)是一個循序漸進(jìn)的過程,影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有很多,只有一一的掌握了實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié),才能購做出完美的實(shí)驗(yàn)。您可知您的ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)為什么會失敗?今天文章的內(nèi)容中,小編將為您找找其中的原因。
 
第yi、標(biāo)本的影響
    溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺可溶性的有色物質(zhì),即顯藍(lán)色,產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
 
第二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
    因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
 
第三、標(biāo)本保存不當(dāng)
    在冰箱中保存過久的標(biāo)本,在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、造成假陽性;為克服上述干擾,ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4
℃,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混合后再測定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不可強(qiáng)烈振蕩。
 
第四、標(biāo)本凝固不全
    在工作中,有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測,常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。 
 

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