膠原蛋白的提取方法
膠原蛋白的提取與純化的目標(biāo)是盡量使膠原提取的產(chǎn)率、純度更高，并且使所提取的膠原能滿足不同領(lǐng)域的要求。迄今為止，膠原的提取方法主要有以下4種：酸法、堿法、鹽法、酶法。在實(shí)際提取過程中，不同提取方法之間往往相互結(jié)合，以取得較好的提取效果。
1、酸法提取
酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原zui大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的，適用于醫(yī)用生物材
料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白，得到高純度的膠原蛋白溶液。余海等[3]采用0.5 mol/L的醋酸溶液在4 ℃下從鼠尾肌腱膠成功提取出I型膠原蛋白。Takeshi等[4]膠原蛋白課題組
采用0.5 mol/L的醋酸溶液從海妒魚、鰭魚、金槍魚、水母等的皮中提取、分離出純度較高的膠原蛋白，并對所提取的膠原蛋白的理化性質(zhì)作了系統(tǒng)的研究。
2、堿法提取
堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1 %～1.5 %石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。
3、鹽法提取
鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷（Tris-HCl）、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。
4、酶法提取
酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解，水解條件溫和，反應(yīng)速率快，提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結(jié)構(gòu)，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有：胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復(fù)合酶。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提取；二步法，即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取，然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預(yù)處理革屑，然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產(chǎn)物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶，再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產(chǎn)物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白，探討了酶和酶的加入量對提取結(jié)果的影響，給出了酶對膠原提取*工藝配比，酶與牛腱的質(zhì)量比為0.1時(shí)效果*，而使用無花果蛋白酶時(shí)，0.01的配比*。
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