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今日分享:ELISA實驗條件如何選擇
在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇十分重要,今日上海恒遠就帶您大概了解一下實驗條件的選擇包括哪些:1.固相載體的選擇:載體的種類有多種,如聚苯乙烯,聚氯乙烯和纖維素等,我們通常用的聚苯乙烯塑料微量滴定板,其優點在于吸附蛋白的性能較好,操作簡便、用量小、適于大批檢測。2.載體的吸附條件:載體的吸附均為物理吸附,吸附一般要求PH在9.0~9.6之間。時間、溫度、蛋白的濃度、離子的強度一定要恰到好處。一般采用4℃過一夜。3.酶標抗體使用濃度的確定:于聚苯乙烯板中加足夠的抗體包被...
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樣本制備方法之蛋白提取的總原則及注意事項
樣本制備是實驗的*步,也是決定實驗成敗的關鍵步驟,獲得的蛋白質樣品必須均質、可溶,并解離成單個多肽亞基,且盡量減少相互間的聚集,使其zui終僅依賴本身的分子量大小進行分離。常見的樣本來源有重組蛋白、細胞和組織等。今天我司小編與您一起分享關于蛋白提取的總原則以及注意事項:蛋白提取的總原則和注意事項:1.盡可能提取*或降低樣本復雜度,只集中提取目的蛋白;2.保持蛋白處于溶解狀態(通過裂解液的pH鹽濃度,表面活性劑,還原劑等的選擇);3.提取過程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修飾等(低...
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恒遠分享:酶聯免疫雙抗夾心法檢測攻略
酶聯免疫檢測方法有間接法,阻斷法,競爭法,夾心法等。夾心法中,包被的抗體與酶標抗體,假如是單抗,理論是不能用一樣的,不外商品化的單抗有可能是混合單抗,識別不同的表位的抗體混在一起,這樣就又可以用一樣的。在今天的技術下載內容中,是恒遠為您分享酶聯免疫雙抗夾心法檢測攻略:一、標本因素不可忽略1.振蕩提取將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中,振蕩,使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組織內部,提取待測組分。①振蕩方式:振蕩器上進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。②在組織樣...
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儲存ELISA試劑盒有這些講究,拿走不謝
用什么方法儲存ELISA試劑盒,對ELISA操作者來說是非常重要的,因為儲存方法直接影響到產品質量。對于開封后試劑盒要以怎樣的方式保存呢?它的有效期是多久?謹記!儲存ELISA試劑盒有這些講究:1.所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意,收到試劑盒后請盡快將標準品、檢測溶液A、檢測溶液B以及96孔板保存于-20℃。2.使用后的試劑盒:剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存,開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃,避免潮濕。3.試劑盒內酶標條可拆卸,按實驗需求可分多次...
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謹記酶聯免疫實驗設計的三大要素
我司技術員結合整理出了酶聯免疫實驗設計的三要素,在測定試劑時大大提高了結果的真實度及其快捷度。為顧客提供了方便,減少了實驗周期,想要實驗真實可靠,務必按照此實驗要素執行,方可解決實驗中務必要的麻煩。謹記酶聯免疫實驗設計的三大要素:*、實驗因素:所有影響實驗結果的條件都稱為影響因素,實驗研究的目的不同,對實驗的要求也不同.影響因素有客觀與主觀,主要與次要因素之分。研究者希望通過研究設計進行有計劃的安排,從而能夠科學地考察其作用大小的因素稱為實驗因素;對評價實驗因素作用大小有一定...
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間接ELISA法OD值相差不大有哪些原因?
做間接ELISA法測試小鼠血清中的IgE抗體,設空白對照、和陰性對照、陽性血清稀釋倍數為5千、1萬、10萬、20萬不等,用的是生物素標記的羊抗鼠IgE抗體,和親和素的辣根過氧化物酶。可是結果除了空白對照孔沒有顏色外,其余各孔全有顏色,而且OD值都相差不大,為什么?下面就由恒遠為大家總結出以下幾個原因!(1)水質被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。(2)洗滌不充分,樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應注滿微孔,充分洗滌。(3)移液頭重復使用,未洗凈或消毒不...
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恒遠告訴您造成ELISA試劑盒標準品溢值的原因
ELISA實驗步驟繁瑣,操作者們所犯的問題也各有不同。不久前有位老師向我司吳咨詢問道:為什么ELISA標準品會出現“溢值”的現象呢?對于這個問題為了方便各位了解,恒遠特將我司技術人員的回答整理分析如下:①樣品/標準品不正確稀釋。②孵育時間/溫度不正確。③在孵育時為蓋上酶聯板覆蓋物:在孵育時需蓋上酶聯板覆蓋物,以防止液體蒸發或孵育期間的污染。每個試劑盒內均有足夠數量的酶聯板覆蓋物。④檢測波長不正確:要保證分光光度劑的檢測波長是正確的。⑤TMB底物的顯色時間過長:請監控顯色時間。...
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恒遠小貼士:一抗的選擇要點和技巧是什么?
(1)單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像dao彈地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對小,檢測抗原靈敏度相對就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現非特異性染色(可以通過封閉等避免)。(2)應用范圍的選擇。有的一抗只能...